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MIP分子到位探针技术基本原理
作者: 整理时间:2006-08-15
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探针结构如上图所示:
红色—SNP位点与基因组DNA同源的配对区域
黑色—PCR引物位置
粉色—第一次酶切裂解位点
蓝色—第二次酶切裂解位点
绿色—与芯片特异性结合的标签序列 |
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反应步骤1:
IP探针混合物退火与基因组DNA（紫色）杂交
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反应步骤2:
色序列与基因组上SNP位点的上下游序列配对杂交，使MIP探针形成一环状，并由聚合酶补平SNP位点
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反应步骤3:
粉色酶解位点裂解，使MIP探针成一线性片段，此片段内已补平了SNP位点 |
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反应步骤4:
如上线性片段两端的引物位点进行PCR扩增，扩增过程中在靠近Tag片断端的引物序列部分标记上相应的荧光，而且在四种曾加入不同dA/dT/dC/dG的管子中分别标记上四种不同的荧光信号，以便于下一步的检测。
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反应步骤5:
蓝色酶解位点裂解，形成如下的带荧光标记的Tag序列混合物
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反应步骤6:
并四种不同荧光标记的Tag序列混合物，与芯片杂交、洗涤、染色、扫描，获得实验结果。 |
 参考文献：
Technology Publications
- Highly multiplexed molecular inversion probe genotyping: Over 10,000 targeted SNPs genotyped in a single tube assay.
Hardenbol, Paul et al. Genome Res. 15(2), 269-275, 2005.
- Multiplexed genotyping with sequence-tagged molecular inversion probes.
Hardenbol, P. et al. Nature Biotechnology 21(6), 673-8, 2003.
- Mismatch repair detection (MRD): high-throughput scanning for DNA variations.
Faham M, et al. Hum Mol Genet. Aug 1;10(16):1657-64, 2001.
- Benchtop Genotyping.
Maneesh Jain, Ph.D., et all. Genetic Engineering News V24: No. 18, 2004.
Genetics Publications
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来源：
人气： 编辑：hoyoyo
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